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DNA Ligation Kit Ver.2.1


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  • 货号 6022
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商家描述 产品评价(3)
说明书:http://www.takara.com.cn/DownLoad/6022.pdf
■ 制品内容 (Code No.: 6022)
Solution Ⅰ:Enzyme Solution 3 × 250 μl
Solution Ⅱ:Concatenation Buffer 1 × 750 μl
Solution Ⅲ:Transformation Enhancer 1 × 200 μl
 
* 如果每次使用7.5 μl Solution Ⅰ则可反应100次。
 
■ 制品说明
本试剂盒是用于快速DNA连接反应的简易系统。在本试剂进行连接反应时,只需要加入一种包含T4 DNA Ligase和最适buffer的酶溶液,终反应液体积小。因为反应高效,大多数连接反应只需3分钟,较难的反应也可在30分钟内完成。
转化之前在连接混合液中加入Solution III(转化增强剂)有助于提高转化效率。如果目的DNA含量低或预期的连接效率较低,建议使用Solution III。连接反应液不必经过DNA纯化,可直接用于细菌的转化。
 
保存
-20℃。Solution融化后室温保存,如果产生沉淀,可涡旋数分钟溶解。
 
■ Ligation Kit 的操作示意图及连接效率图
 
 
使用注意
1. 试剂盒中的Solution Ⅰ和Solution Ⅱ建议-20℃保存,反复冻融不会失活。Solution Ⅰ因含有T4 DNA Ligase,使用前请在冰中融化并轻柔混匀。Solution Ⅱ可在室温融化并混匀。Solution Ⅲ一旦融化,就应于室温保存,若有沉淀,使用前请涡旋溶解。
2. DNA连接液可直接用于琼脂糖凝胶电泳。如要进行聚丙烯酰胺凝胶电泳时,建议使用乙醇沉淀法*浓缩 DNA,请不要用苯酚抽提DNA连接液。
* 乙醇沉淀法:
1) 在反应液中加入1/10体积的3 M CH3COONa (pH5.2) 或1/20体积的5 M NaCl和2-2.5倍体积的无水乙醇。
2) -20℃静置20分钟或-80℃静置10分钟。
3) 4℃离心收集DNA。当DNA的含量较少时,可加入carrier使沉淀效果更好。
3. 如果在反应液中加入苯酚,则会出现类似沉淀物的白色浑浊,将不能用于连接反应。

 

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