T4 Polynucleotide Kinase
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  • 货号 M0201V
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T4 多聚核苷酸激酶

#M0201V                   250 units                                 ¥289  

#M0201S                    500 units                                 ¥569

#M0201L                    2,500 units                              ¥2,549

 

T4 多聚核苷酸激酶 (3´  磷酸酶活性缺失)

#M0236S                    200 units                                 ¥1,209

#M0236L                    1,000 units                              ¥4,809

特性

DNA 或 RNA 5´ 末端的磷酸化,以便进行连接反应

DNA 或 RNA 的末端标记,用作探针和进行 DNA 测序
用 T4 多聚核苷酸激酶(NEB #M0201)除去 3´ 磷酸基团
将 3´ 端已经磷酸化的单核苷酸 5´磷酸化,制备 pNp 底物,利用 T4 多聚核苷酸激酶 (缺失 3´ 磷酸酶活性 ) (NEB #M0236 )将其加到 DNA 或 RNA的 3´ 端

用 T4 多聚核苷酸激酶(缺失 3´ 磷酸酶活性)(NEB #M0236)对 3´ 端有磷酸基团的寡核苷酸的 5´ 端进行标记

概述

T4  多聚核苷酸激酶能够催化  ATP  的  γ- 位磷酸基团转移到寡核苷酸链(双链或单链  DNA  或 RNA)的  5´-羟基末端以及  3´ - 单磷酸核苷上。T4 多聚核苷酸激酶(NEB  # M0201)还具有  3´ 磷酸酶活性,将 

3´ - 磷酸基团从寡核苷酸的  3´  磷酸末端、脱氧  3´ - 单磷酸核苷和脱氧  3´ -二磷酸核苷上水解掉。经修饰后的酶(NEB  #M0236)具有所有激酶的活性,但是缺失了 3´ 磷酸酶活性。

来源

重组  E.  co/i  菌株,克隆有 T4 多聚核苷酸激酶或修饰的 T4 多聚核苷酸激酶基因。

反应条件

1X T4 多聚核苷酸激酶反应缓冲液
[ 70 mM  Tris- HCl(pH 7.6  @  25℃),10 mM  MgCl2,5 mM DTT ],37 ℃ 温育。
热失活:65 ℃ 20 分钟。

注意事项

最佳酶活力的发挥需要新鲜缓冲液(在旧缓冲液中,由于氧化造成的 DTT 含量减少会降低酶活力)。

 

放射性标记反应:50 μl  反应体系中,用 1X T4 多聚核苷酸激酶反应缓冲液、50 pmol 的 γ-[32P ] ATP 和
20 单位的酶 37 ℃ 温育 30 分钟可催化 1- 50 pmol 的  5´  末端磷酸化。[33P ]  ATP  可代替  [32P ]  ATP  作标记反应。

 

CTP、GTP、TTP、UTP、dATP 及 dTTP 均可替代 ATP 作为磷酸供体。

 

DNA  或  RNA  磷酸化反应(放射性和非放射性)操作流程请查询 www.neb.com

www.neb-china.com

 

要提高平齐末端或 5´ 凹陷末端的磷酸化效率,可在加入 T4 多聚核苷酸激酶前,先将  DNA  溶液于 70℃ 加热 5 分钟,然后冰上冷却,并加入 5%(W/ V)的 PEG-8,000。

 

T4  多聚核苷酸激酶需要  ATP 才能发挥活性,但是为了适用于高活力的放射性标记反应,在随酶提供的反应缓冲液中不含 ATP。

 

一般来说,进行激酶反应之后是连接反应。在这种情况下,T4 多聚核苷酸激酶反应在连接酶反应缓冲液中 37 ℃ 温育 30 分钟即可。反应后的产物可直接进行连接,无需改变缓冲液和进行热失活。如果连接时需要保持其它  DNA  片段的去磷酸化状态,则需要在连接反应前热失活 T4 多聚核苷酸激酶。

质保声明

T4 多聚核苷酸激酶和  T4 多聚核苷酸激酶(3´ 磷酸酶活性缺失)经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请登陆  www.neb.comwww.neb-china.com

单位定义

1 单位即 1 个 Richardson 单位,指 37℃ 条件下,30 分钟内催化 1 nmol 酸不溶性 [32P] 掺入所需要的酶量(1)。单位活性检测条件请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。  

浓度

10,000 units/ml。  

参考文献

关于该酶性质和产品应用的参考文献,请登陆 www.neb.comwww.neb-china.com

 

在 50 μl T4 多聚核苷酸激酶反应缓冲液体系中,37℃ 温育 30 分钟,γ- 磷酸基团从 ATP 转移至  d(T)的  5´ 羟基末端  [ ATP 与 d(T)8比例是 1:1,量为 50  pmol ],结果显示 20 单位酶量可使超过 90% 的磷酸基团转移。

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