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Takara嵌合法Real Time PCR(qPCR)产品的名称从2017年12月下旬开始,将逐步变更为「TB Green系列」。产品Code、性能和原有产品相比没有变化,请继续放心使用。
产品名称将随新lot的产品逐步变更,产品网页或操作说明书可能会先于产品标签变更,望知悉!
制品说明
本制品是采用SYBR® Green I*嵌合荧光法进行Real Time PCR的专用试剂。制品中含有Real Time PCR反应的最适浓度SYBR® Green I,是一种2×浓度的Premix Type试剂,进行实验时,PCR反应液的配制十分方便简单。制品中使用了抗Taq抗体的的Hot Start法用DNA聚合酶TaKaRa Ex Taq HS,与Real Time PCR用最适Buffer组合,可以有效抑制非特异性的PCR扩增,大大提高PCR的扩增效率,可以进行高灵敏度的Real Time PCR扩增反应。另外,本制品中添加了Tli RNaseH(耐热性RNaseH),以cDNA作为模板进行PCR反应时,可以最大限度抑制由于cDNA中残存mRNA对PCR反应造成的阻害作用。
本制品适合于快速Real Time PCR扩增反应,可以在宽广的定量区域内得到良好的标准曲线,对靶基因进行准确定量、检测,重复性好,可信度高。
特长:
1. 适用于Real Time PCR反应,可以快速、准确地对目的基因进行检测、定量。
2. 在2×浓度的Premix中,预先混有SYBR® Green I,PCR反应液配制时,只需加入模板、
引物、灭菌蒸馏水便可进行Real Time PCR反应,操作简单方便。
3. DNA聚合酶使用了TaKaRa Ex Taq HS,可以进行Hot Start法PCR反应,再与Takara公司独自开发的Buffer系统相结合,具有高扩增效率,高扩增灵敏度之特点。
4. 在2×浓度的Premix中,预先添加了耐热性RNaseH(Tli RNaseH),可以最大限度抑制以
cDNA作为模板进行PCR反应时,由于cDNA中残存mRNA对PCR反应造成的阻害作用。
●试剂盒原理
本制品使用了TaKaRa Ex Taq HS进行PCR扩增,通过检测反应液中SYBR® Green I的荧光强度,达到监控PCR产物扩增量的目的。
1.PCR
PCR法是以微量DNA进行目的片段扩增的方法。通过DNA链的热变性、引物退火、DNA聚合酶作用下引物的延伸三个步骤循环往复,可在短时间内扩增DNA达100万倍以上。本制品中的DNA聚合酶由于使用了TaKaRa Ex Taq HS,从而抑制在调制反应液等低温条件下由引物产生的非特异性退火或引物二聚体引起的非特异性扩增,大大提高PCR扩增灵敏度。
2.嵌合荧光检测法
SYBR® Green I与双链DNA结合后发出荧光,所以可以通过检测反应体系中的SYBR® Green I荧光强度,达到检测PCR产物扩增量的目的。
具体原理见下图。通过PCR反应生成双链DNA,SYBR® Green I与双链DNA结合发出荧光,通过检测PCR反应液中的荧光信号强度,可以对目的基因进行准确定量,同时还可以测定扩增的目的DNA片段的融解温度。
●保存: 4℃。
注意:1. 4℃可保存6个月。
2. 避光保存,避免污染。
3. 干冰运输,到货后4℃避光保存。
4. 长期保存请置于-80℃,勿存于-20℃。产品融解后请于4℃保存,并在6个月内用完。
●使用注意
以下为使用本试剂盒时的注意事项,使用前一定认真阅读。
1. 使用前,请上下轻轻颠倒混匀,避免产生气泡,防止因混合不均匀造成的反应效果不佳。(1) 请勿涡旋振荡混匀。
(2) SYBR® Premix Ex Taq (2×conc.)在-80℃存放可能会产生白色或淡黄色的沉淀,可用手握缓慢溶解,于室温短时间避光放置,轻柔上下颠倒混匀直至沉淀全部消失。
(3) 沉淀会导致溶液成分不均匀,使用前务必充分混匀试剂。
2. 配制反应液时,试剂请于冰上放置。
3. 本制品中含有荧光染料SYBR® Green I,配制PCR反应液时应避免强光照射。
4.反应液的配制、分装请一定使用新的(无污染的)枪头、Microtube等,尽量避免污染
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