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2X M5 HiPer Realtime PCR Super mix with Low Rox (SYBRgreen,with anti-Taq) (抗体法qPCRmix,低Rox预混)
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  • 货号 MF797-01
  • 品牌 Mei5bio/聚合美
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  • 规格/包装 5x1ml
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商家描述 商家资质信息 产品评价(0)

储存条件】   长期保存,请置于-20˚C,有效期24个月。经常使用,可置于4˚C保存至少六个月。


产品简介

本产品是采用SYBR Green I嵌合荧光法进行实时荧光定量PCR的专用2×浓度预混液。利用HotStart Taq DNA Polymerase高温加热前,anti-Taq单克隆抗体与Taq酶结合,抑制Taq酶的聚合酶活性,从而抑制在低温条件下出现的由引物和模板DNA非特异性杂交或引物二聚体引起的非特异性扩增。Anti-Taq单克隆抗体在PCR反应第一循环的变性步骤中已完全失活,不会阻碍之后的Taq Polymerase反应,大大提高了PCR反应的灵敏度及特异性。优化浓度的SYBR Green I 荧光染料,特异性地掺入DNA双链后,荧光信号增强,而不掺入链中SYBR Green I染料分子荧光信号不变,从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步,荧光可以在退火或延伸阶段测定。


产品组份】  HotStart Taq DNA Polymerase、SYBR Green I、dNTPs、Mg2+、low ROX、反应缓冲液、稳定剂和增强剂。


适用范围

ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差,一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR 扩增仪。不同仪器的激发光学系统有所不同,因此ROX染料的浓度必须与相应的荧光定量PCR仪相匹配。本产品适合需要Low ROX校正的仪器

ABI Prism7500/7500 Fast,QuantStudio 3 System,QuantStudio 5 System,QuantStudio 6 Flex System,QuantStudio 7 Flex System,ViiA 7 system,Stratagene Mx3000/Mx3005P,Corbett Rotor Gene 3000等。


所需试剂

本产品为2×预混荧光定量PCR反应体系,使用时只需加入模板、引物和水,使其工作浓度为1×,即可进行反应。具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点,可最大限度地减少人为误差、节约PCR实验操作时间、降低污染几率。


操作示例

按下表配制PCR反应体系:

Template DNA 

X* µl

2X M5 HiPer Realtime PCR Super mix with Low Rox                       

10 μl

 Primer 1 (10μM)                     

0.5 µl

 Primer 2 (10μM)                     

0.5 µl

 ddH2O补足至

20 µl


建议的PCR条件

95°C

30-60 sec.

35-40 cycles of:

95°C

15 sec.

55–65°C

15 sec.

72°C

30-60 sec*.

*一般情况下目标片段在300bp以下时,延伸时间30秒即可,但一部分仪器,为测定稳定的荧光,延伸时间需要大于30秒。扩增曲线散乱,或者各孔间差异较大时,请设定较长的延伸时间(45-60秒)。




*:10~100 ng基因组 DNA ,或1~10 ng cDNA为参照 ,因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同,可对模板进行梯度稀释,以确定最佳的模板使用量。另外two Step RT PCR反应的 cDNA (RT 反应液)作为模板时的添加量不要超过PCR反应液总体积的10% 。


注意事项

 1. 使用前请上下颠倒轻轻混匀,尽量避免起泡,并经短暂离心后使用。

2. 尽可能减少在光下的曝露时间,长时间的曝光可导致荧光信号强度的丧失。 本品不能用于杂交探针法



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