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羊驼重链抗体(HcAb)为天然存在的仅由两条重链组成的特殊抗体,羊驼重链抗体(HcAb)通过重链上的一个可变区(VHH)结合抗原,该可变区可以单独稳定地在体外存在,被称为纳米抗体(Nanobody)。纳米抗体分子量仅为传统完整抗体的1/10(约15KD)但依然具有完整的抗原识别能力,一般通过噬菌体筛选得到完整抗体序列。得益于纳米抗体微小的结构、完整的抗原识别能力以及噬菌体筛选技术,纳米抗体表现出高亲合力、高特异性、强穿透性和易于改造和表达等特点,并且由于可以获得抗体完整序列,纳米抗体可以通过体外重组表达高质量稳定生产,有效避免传统抗体的批次间差异问题。
Anti- Mouse VHH IP Agarose Beads是使用小鼠IgG作为抗原制备羊驼纳米抗体偶联琼脂糖珠悬浮液,适用于所有的鼠源抗体的分离和免疫沉淀实验。
和传统抗体或者ProteinA/G相比,本产品具有多项优势:
*直接使用,不需偶联proteinA/G和琼脂糖珠
*在下游应用中没有重链和轻链污染
*可以用严格的条件清洗
*5-30min极短孵育时间
*高产量,质量稳定,没有批次差异性
使用说明:
* 建议使用大口径移液器吸取液体,开小瓶后,建议用封口膜密封瓶盖,防止缓冲液蒸发;
* 微珠储存时会沉于底部,初次使用之前,轻柔混匀本产品(勿涡旋),以确保琼脂糖珠均匀混悬于保存液中。
免疫沉淀实验步骤:
1.细胞裂解物的预制备:
加50μl Anti-Mouse Nanobody IP Beads到装有500μl细胞裂解物的微量离心管中,冰上孵育30分钟。10000xg离心3分钟后把上清液转移到新的离心管中。
2. 免疫沉淀:
在装有预清洗的细胞裂解物的离心管中加入5μg的一抗,孵育 1小时。再加入50 μL Anti-Mouse Nanobody IP Beads,在摇床上孵育1小时。将离心管以10000×g离心1分钟。完全去除上清液并用500 μL裂解缓冲液(50mM Tris-HCl, pH 8.0; 150mM NaCl; 1% NP-40)洗涤3次。
3. SDS-PAGE样品制备:
最后一次洗涤并吸出上清液后,加入100μL Laemmli Buffer (含50 mM DTT 或者 2% 2-mercaptoethanol)。涡旋混匀后加热至90-100°C, 10 min,10000×g离心3分钟,收集上清液(避免搅动Anti-Rabbit Ig Beads), SDS-PAGE凝胶电泳。
Anti- Mouse VHH IP Agarose Beads是使用小鼠IgG作为抗原制备羊驼纳米抗体偶联琼脂糖珠悬浮液,适用于所有的鼠源抗体的分离和免疫沉淀实验。
和传统抗体或者ProteinA/G相比,本产品具有多项优势:
*直接使用,不需偶联proteinA/G和琼脂糖珠
*在下游应用中没有重链和轻链污染
*可以用严格的条件清洗
*5-30min极短孵育时间
*高产量,质量稳定,没有批次差异性
使用说明:
* 建议使用大口径移液器吸取液体,开小瓶后,建议用封口膜密封瓶盖,防止缓冲液蒸发;
* 微珠储存时会沉于底部,初次使用之前,轻柔混匀本产品(勿涡旋),以确保琼脂糖珠均匀混悬于保存液中。
免疫沉淀实验步骤:
1.细胞裂解物的预制备:
加50μl Anti-Mouse Nanobody IP Beads到装有500μl细胞裂解物的微量离心管中,冰上孵育30分钟。10000xg离心3分钟后把上清液转移到新的离心管中。
2. 免疫沉淀:
在装有预清洗的细胞裂解物的离心管中加入5μg的一抗,孵育 1小时。再加入50 μL Anti-Mouse Nanobody IP Beads,在摇床上孵育1小时。将离心管以10000×g离心1分钟。完全去除上清液并用500 μL裂解缓冲液(50mM Tris-HCl, pH 8.0; 150mM NaCl; 1% NP-40)洗涤3次。
3. SDS-PAGE样品制备:
最后一次洗涤并吸出上清液后,加入100μL Laemmli Buffer (含50 mM DTT 或者 2% 2-mercaptoethanol)。涡旋混匀后加热至90-100°C, 10 min,10000×g离心3分钟,收集上清液(避免搅动Anti-Rabbit Ig Beads), SDS-PAGE凝胶电泳。
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