步骤

服务内容

配套产品

明确物种和载体

不同物种不同载体（见下表）

设计靶点

一般在不同转录产物的共同外显子上设计3-5个靶点，靶点位置尽量在基因CDS的前1/3，ATG之后，不在最后一个exon上，最好能破坏重要的domain和所有的转录产物isoform。

合成

合成前请检测靶点是否存在SNP（如果存在SNP，则不能用T7E1酶检测是否存在突变）

e-TALEN构建试剂盒

靶点切割活性检测（可选）

293T细胞内检测SSA活性

SSA活性报道质粒构建试剂盒

内源活性验证（有条件选择）

若目的细胞转染效率高，如293T细胞，可转染72h后提基因组，扩增靶序列，T7E1酶切验证，进一步测序验证

T7E1酶

双元载体连接（有条件选择）

连接到植物或酿酒酵母的双元载体上

植物双元载体、酿酒酵母双元载体

编号

表达启动子

体外转录启动子

功能区域

用途

VK006-01

CAG

Sp6

FOKI

E-TALEN；哺乳动物基因组DNA剪切

VK006-02

CMV

Sp6

FOKI

E-TALEN；哺乳动物基因组DNA剪切

VK006-03

CMV

Sp6

FOKI

GFP/mCherry标签，E-TALEN；哺乳动物基因组DNA剪切

VK006-04

CMV

T7

FOKI

GFP/mCherry标签，E-TALEN；哺乳动物基因组DNA剪切

VK006-05

CMV

T7

FOKI

哺乳动物kozad序列，体外转录mRNA，动物基因敲除

VK006-06

T7

FOKI

家蚕kozad序列，体外转录mRNA，家蚕基因敲除

VK006-07

T7

FOKI

果蝇kozad序列，体外转录mRNA，果蝇基因敲除

VK006-08

CAG

Sp6

VP64

TALEA or TALE-TF, 激活內源基因的转录

VK006-09

CMV

Sp6

VP64

TALEA or TALE-TF, 激活內源基因的转录

我们提供：

1、 构建完成的TALEN质粒（冻干粉和菌）

2、 TALEN构建合成报告

3、细胞内TALEN的SSA实验检测报告（可选）

质量保证：

 序列完全正确TALEN质粒，完整的设计合成报告

交货期：

 2-3工作周（如客户选择可选项目，需要增加收货时间）