步骤 |
服务内容 |
配套产品 |
明确物种和载体 |
不同物种不同载体(见下表) |
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设计靶点 |
一般在不同转录产物的共同外显子上设计3-5个靶点,靶点位置尽量在基因CDS的前1/3,ATG之后,不在最后一个exon上,最好能破坏重要的domain和所有的转录产物isoform。 |
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合成 |
合成前请检测靶点是否存在SNP(如果存在SNP,则不能用T7E1酶检测是否存在突变) |
e-TALEN构建试剂盒 |
靶点切割活性检测(可选) |
293T细胞内检测SSA活性 |
SSA活性报道质粒构建试剂盒 |
内源活性验证(有条件选择) |
若目的细胞转染效率高,如293T细胞,可转染72h后提基因组,扩增靶序列,T7E1酶切验证,进一步测序验证 |
T7E1酶 |
双元载体连接(有条件选择) |
连接到植物或酿酒酵母的双元载体上 |
植物双元载体、酿酒酵母双元载体 |
编号 |
表达启动子 |
体外转录启动子 |
功能区域 |
用途 |
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VK006-01 |
CAG |
Sp6 |
FOKI |
E-TALEN;哺乳动物基因组DNA剪切 |
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VK006-02 |
CMV |
Sp6 |
FOKI |
E-TALEN;哺乳动物基因组DNA剪切 |
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VK006-03 |
CMV |
Sp6 |
FOKI |
GFP/mCherry标签,E-TALEN;哺乳动物基因组DNA剪切 |
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VK006-04 |
CMV |
T7 |
FOKI |
GFP/mCherry标签,E-TALEN;哺乳动物基因组DNA剪切 |
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VK006-05 |
CMV |
T7 |
FOKI |
哺乳动物kozad序列,体外转录mRNA,动物基因敲除 |
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VK006-06 |
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T7 |
FOKI |
家蚕kozad序列,体外转录mRNA,家蚕基因敲除 |
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VK006-07 |
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T7 |
FOKI |
果蝇kozad序列,体外转录mRNA,果蝇基因敲除 |
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VK006-08 |
CAG |
Sp6 |
VP64 |
TALEA or TALE-TF, 激活內源基因的转录 |
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VK006-09 |
CMV |
Sp6 |
VP64 |
TALEA or TALE-TF, 激活內源基因的转录 |
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