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步骤 |
服务内容 |
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明确物种和载体 |
不同物种不同载体 （见下图） |
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设计靶点 |
一般在不同转录产物的共同外显子上设计3-5个靶点，靶点位置尽量在基因CDS的前1/3，ATG之后，不在最后一个exon上，最好能破坏重要的domain和所有的转录产物isoform。 |
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合成 |
合成前请检测靶点是否存在SNP （如果存在SNP，则不能用T7E1酶检测是否存在突变） |
CRISPR/Cas9快速构建试剂盒 |
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靶点切割活性检测 |
293T细胞内检测SSA活性 |
CAS9酶体外切割活性验证 |
Cas9-gRNA靶点效率检测试剂盒、CAS9酶 |
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内源活性验证（有条件选择） |
若目的细胞转染效率高，如293T细胞，可转染72h后提基因组，扩增靶序列，T7E1酶切验证，进一步测序验证。 |
T7E1酶 |
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